本标准等效采用国际标准ISO 2913—1975《羊毛——用比色法测定羊毛水解物中胱氨酸加半胱氨酸的含量》。
1主题内容与适用范围
本标准规定了测定羊毛水解物中胱氨酸含量的方法。
本标准适用于未经氧化、还原和染色的洗净纯羊毛、毛条、毛纱、毛线和织物。
2原理
羊毛纤维在硫酸溶液中水解生成胱氨酸，再用焦亚硫酸钠分解胱氨酸，生成的半胱氨酸与十二磷钨酸作用产生蓝色溶液，溶液颜色的深浅与水解物中胱氨酸含量成正比，通过对蓝色溶液吸光度的测定，并与标准胱氨酸溶液吸光度比较，可计算出羊毛纤维的胱氨酸含量。如果被测试的羊毛含有比正常高得多的半胱氨酸量，可按附录A(补充件)进行定性检验。
3试剂
测试所用的水为蒸馏水或去离子水，试剂为分析纯。
3．1 c(H2SO4)=2．7 mol／L的硫酸溶液：密度为1．84 g／m1，95％～98％硫酸150 mL加到850 mL水中。
3．2乙酸盐缓冲溶液，pH 5．6：209 g无水乙酸钠，24 mL冰乙酸和0．001 g硫酸铜(CuS04•5H2O)溶于水中，并稀释到1 000 mL。
3．3十二磷钨酸溶液：在1 000 mL三角烧瓶中放入200 g钨酸钠，加入400 mL水，再加入100 mL 85％磷酸，装上冷凝器，回流1 h，移去冷凝器，逐滴加入溴水，直至溶液由亮黄色变成棕褐色为止，煮去过量的溴(15～20 min)，过滤，滤液移入1 000 mL棕色容量瓶中，用水稀释至刻度。
3．4焦亚硫酸钠溶液：10 g焦亚硫酸钠溶于水中，移入100 mL棕色容量瓶中，并稀释至刻度。溶液超过20 d，需重新配制。
3．5胱氨酸标准溶液：0．100 0 g胱氨酸(生化试剂)溶于20 mL硫酸溶液(3．1)中，移入250 mL棕色容量瓶中，用水稀释至刻度(现用现配)。
3．6二氯甲烷。
4仪器
4．1分析天平：精确度为0．000 2 g。
4．2称量瓶。
4．3鼓风烘箱：105±2℃。
4．4干燥器。
4．5棕色容量瓶：25，100，l 000 mL。
4．6移液管：1，2，5，10，15 mL。
4．7三角烧瓶：100，l 000 mL。
4．8玻璃砂芯漏斗：容量为35 mL，滤片平均滤孔为40～80μm。
4．9分光光度计或最大吸收波长在720～800 nm的滤色光度计：在0．2～0．7范围内的吸光度读数精度为0．01。
4．1 0索氏萃取器。
5试样制备
除去试样中植物性物质和其他杂物，样品如织物可拆成纱线，并把纱线剪成1 cm长度，毡类织物则剪成小块。然后，把试样用滤纸包好放入索氏萃取器中，用二氯甲烷萃取1 h(至少循环6次)。取出试样，待试样中二氯甲烷挥发后，把试样暴露24 h后待称重。
6操作步骤
6．1 试样称量
6．1．1 称1±0．000 2 g试样两份，用以测定干燥重量。
6．1．2称0．3±0．000 2 g试样两份，为生成水解物用以测定胱氨酸含量。
6．2绝干重量测定
把试样(6．1．1)放入已达恒重的称量瓶内，瓶盖放在瓶边，放入105±2℃的鼓风烘箱中，烘干后(一般需2～4 h)盖上瓶盖，移入干燥器内，冷却，称重，重复上述操作直至达到恒重，算出平均干重W1，然后按比例计算水解物试样的干重W(W=0．3×W1)。
6．3水解
把试样(6．1．2)分别放入100 mL三角烧瓶中，加入8 mL硫酸溶液(3．1)，然后将三角烧瓶放入105±2℃烘箱中，每隔0．5 h摇动一次瓶子，使试样浸润于硫酸溶液中发生水解反应，待试样充分浸润于硫酸溶液时(约需2．5～3 h)可停止摇动，使试样继续水解，10 h后取出三角烧瓶，冷却至室温，把瓶中的试液全部定量地移入100 mL容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀。然后用干燥的漏斗进行过滤，滤液至少50 mL，作测定其吸光度用。
6．4吸光度测定
6．4．1 采用10 mm的比色池，最大吸收波长选择720～800 nm区域。
6．4．2 以蒸馏水作为测定吸光度时的参比溶液。
6．4．3试样水解液中半胱氨酸吸光度的测定。
用移液管吸取5 mL滤液置于25 mL容量瓶中，加入15 mL缓冲溶液(3．2)，再加入2 mL十二磷钨酸溶液(3．3)，充分混和，放置20～30 min，用水稀释至刻度，测定其吸光度，测定两次，取得吸光度平均值再除以5得A值。
6．4．4试样水解液中胱氨酸、半胱氨酸吸光度的测定。
用移液管吸取l mL滤液移入25 mL容量瓶中，加入5 mL缓冲溶液(3．2)，1 mL焦亚硫酸钠溶液 (3．4)和2 mL十二磷钨酸(3．3)，充分混和，放置20～30 min，再用水稀释至刻度，测定其吸光度，测定两次，取得吸光度平均值为B。
6．4．5胱氨酸标准溶液吸光度的测定。
用移液管吸取l mL胱氨酸标准溶液，按6．4．4进行测定，测定两次，取得吸光度平均值为c(c值必须在0．56～0．7范围内)。
7分析结果的计算
8对照试验
每次系列试验用未处理原样作对照试验。
9试验报告
a． 未处理试样胱氨酸含量；
b． 各处理试样胱氨酸含量；
c． 注明按本标准方法测试。
附 录 A
定 性 试 验
(补 充 件)
如被测试的羊毛含有比正常高得多的半胱氨酸量，可按下述定性试验进行检验。
A1未染色羊毛
将样品浸入1％亚硝酰铁氰化钠溶液中，完全浸透后，取出，夹在滤纸间干燥，并暴露在氨气下，样品呈红紫色表示半胱氨酸残留物存在。
A2羊毛水解液
取2～3 mg羊毛水解液放入试管，加入2～3滴1％亚硝酰铁氰化钠溶液，并滴加浓氨水，立即变成红紫色，表示半胱氨酸残留物存在。
附加说明：
本标准由中华人民共和国纺织工业部提出。
本标准由纺织工业部标准化研究所归口。
本标准由上海毛麻纺织科学技术研究所负责起草。
本标准主要起草人徐壁城、储国强、沈美华、钱瑞莲。